单芽管杨盘二孢菌候选效应因子的克隆与分析开题报告

1. 研究目的与意义

锤舌菌纲柔膜菌目的单芽管杨盘二孢菌可造成白杨派树种产生叶部黑斑病，造成叶片的提早脱落和降低杨树生长量。

近期我们针对其中一个单孢分离菌株nl1进行了全基因组测序。

通过初步的生物信息学分析发现，其具有200-300个效应因子候选基因。

2. 国内外研究现状分析

随着杨树全基因组测序及杨生褐盘二孢菌全基因组测序工作的完成，利用分子生物学手段研究病原菌的致病机制以及杨树抗黑斑病机制提供了新的思路，我国南京林业大学专家、学者在杨树抗黑斑病分子标记、抗病基因筛选、基因表达分析等方面做出了突出贡献。

曾燕如利用荧光差异显示反转录聚合酶链式反应（ddrt-pcr），从杨树黑斑病的感抗无性系中分离出12个与抗病相关的cdna 片段，这些片段与病原菌识别、超敏反应体系表达基因、系统获得抗性和细胞保护机制等有关，并在此基础上构建了感抗无性系的cdna文库，为杨树黑斑病抗病机理的研究奠定了一定的基础。

张新叶利用est技术从构建好的2个杨树感抗黑斑病叶片cdna文库中随机挑取克隆进行测序，获得 21657 条est序列，其中unigenne10816个，含量较高的、有功能的基因主要是杨树叶片组织特异性相关基因和杨树叶片受外界胁迫表达的抗逆相关基因。

3. 研究的基本内容与计划

通过对已经测序完毕的基因进行筛选和分析，针对筛选出的效应因子基因进行克隆，构建植物表达载体，将目的基因导入细胞，使其在烟草中进行瞬时表达，分析活性氧爆发情况，筛选出抑制活性氧爆发的效应因子。

4. 研究创新点

利用烟草的瞬时表达具有时间短，不需要整合到染色体上等优势，能够快速的获得表达目的基因的植株，从而进一步研究该基因的作用。

这种瞬时表达技术已经成为植物功能基因组研究的重要技术手段之一，在研究启动子活性、顺式作用元件的转录活性、转录调控蛋白功能等方面起着重要作用。

用分子生物学手段研究杨生褐盘二抱菌的致病机制以及杨树抗黑斑病机制是防治杨树病虫害的新思路，同时也是一个趋势。