青钱柳三萜皂苷代谢途径中关键酶基因克隆的初步研究开题报告

1. 研究目的与意义

研究的目的：进一步探究青钱柳三萜皂苷代谢途径中关键酶，为以后青钱柳人工定向培育提供基础。

意义：青钱柳（Cyclocarya paliurus (Batal.) Iljinskaja），系胡桃科（Juglandaceae）青钱柳属植物，广泛分布于我国南方地区的速生树种。青钱柳具有明显的降血糖、减肥、抗肿抗衰老、抗过敏、清热解暑、提高人体免疫力、促进新陈代谢等多种功效，尤其对治疗糖尿病有显著疗效。青钱柳有很多生物活性的代谢产物，如:黄酮、多糖、甾醇、有机酸、生物碱、微量元素以及三萜皂苷。其中，三萜皂苷是十分重要的次生代谢产物，有抗炎消肿、降血脂等作用。三萜皂苷一般从植物中提取或化学合成法，但因其在植物中含量低，成本高，不被广泛推广。因此，从分子水平上研究三萜皂苷代谢途径，初步研究合成的关键酶的表达模式，有利于促进的青钱柳三萜皂苷大规模生产。

2. 国内外研究现状分析

青钱柳研究进展：

经过半个世纪的研究，表明青钱柳具有降血糖、降血脂、调节胆固醇和抗菌作用。目前从青钱柳分离出山柰酚、槲皮素、异槲皮苷等17种黄酮类及苷类化合物，青钱柳酸a、青钱柳酸b、青钱柳苷Ⅰ、青钱柳苷Ⅱ、青钱柳Ⅲ等26种萜类及甾体化合物，苯甲酸、香草酸、没食子酸等18种有机酸化合物，色氨酸、岩白菜內酯、肌醇等14种其他类化合物。

三萜皂苷研究现状：

3. 研究的基本内容与计划

研究内容：

实验材料为南京大学温室一年生青钱柳幼苗。选取12株长势相近的同种源青钱柳，分别编号：a1、a2、a3、a4、b1、b2、b3、b4、c1、c2、c3、c4，a、b、c分别为三个重复，取样时间：1组从2017年4月起，每月末取样，到9月末，共计6次；

取样方法：分别随机摘取每棵幼苗根、茎、叶若干，将同一个组相同组织混在一起，茎（当年生枝）与根需切成厚度约1 mm/段。液氮速冻，然后储存于-80 ℃冰箱备用。分别提取rna，同一个组中不同个体rna等量混合到一个样品中。

4. 研究创新点

从分子水平研究青钱柳三萜皂苷代谢途径中关键酶，从而丰富青钱柳的基因资源，为今后定量合成三萜皂苷奠定基础。