痤疮丙酸杆菌共轭亚油酸异构酶的可溶性表达研究开题报告

1. 研究目的与意义

一.共轭亚油酸异构酶，来源于痤疮丙酸杆菌，是生产共轭亚油酸的主要酶种，具有良好的应用价值。但该酶在大肠杆菌中表达主要以包涵体形式存在，严重影响了该酶的活性表达。

二.本研究拟使用伴侣蛋白和该蛋白进行共表达，有望提高该酶在大肠杆菌系统中的可溶性表达。

2. 国内外研究现状分析

张艳禾等人将来源于罗伊氏乳酸杆菌PYR8的亚油酸异构酶基因克隆至大肠杆菌中表达，并对形成的包涵体进行复性研究，由此获得有活性的重组酶；Zhang等人则将坐床丙酸杆菌的亚油酸异构酶基因克隆至解脂耶氏酵母中，对油脂成分提取分析发现其共轭亚油酸含量占总油脂含量的6%，有所提高。Cody等人对亚油酸异构酶催化所得的共轭亚油酸进行生物活性分析，通过肿瘤细胞实验发现其所存在的潜在抗肿瘤活性；Peng等人成功从生梭孢菌的膜结合蛋白中分离纯化亚油酸异构酶，并对其酶学性质作了深入的研究。

3. 研究的基本内容与计划

我们选用物种不同的伴侣蛋白，将目的蛋白包涵体与其共表达，在不断的实验中改变伴侣蛋白，控制变量，确定何种伴侣蛋白相组合表达最好。

同时，环境因素也会影响到蛋白的表达，如不同的温度、ph值、诱导剂的浓度。

在确定伴侣蛋白后进行对照试验，控制变量，观察结果确定最适合条件。

4. 研究创新点

本实验实现了伴侣蛋白与原蛋白的共表达，提高了大肠杆菌系统中该酶的活性表达。