细菌群感信号分子降解酶AidH的功能性表达及纯化研究开题报告

1. 本选题研究的目的及意义

细菌群感(quorumsensing,qs)是指细菌通过分泌和感知信号分子,调控基因表达、生理行为以及群体行为的一种复杂通讯系统。

群感信号分子在细菌生物被膜形成、毒力因子产生、抗生素耐药性等方面发挥着重要作用。

因此,抑制细菌群感系统被认为是控制细菌感染的有效策略之一。

2. 本选题国内外研究状况综述

细菌群感抑制近年来成为研究热点，国内外学者在群感信号分子降解酶方面开展了大量研究工作。

国内研究现状：近年来，国内学者在群感信号分子降解酶方面取得了一定的进展。

例如，上海交通大学的研究团队发现了一种新型ahl降解酶aiia，并对其催化机制进行了深入研究[1]。

3. 本选题研究的主要内容及写作提纲

本研究的主要内容包括以下几个方面：1.aidh基因的克隆与表达：从已知菌株中获取aidh基因序列，构建表达载体，并在大肠杆菌表达系统中进行诱导表达。

2.aidh酶的纯化：利用镍柱亲和层析等技术对表达的aidh酶进行纯化，并通过sds-page电泳分析其纯度。

3.aidh酶的活性测定：建立aidh酶活性测定方法，并对其酶促反应动力学参数进行测定。

4. 研究的方法与步骤

本研究将采用基因工程技术、蛋白质纯化技术以及酶学分析技术等方法，具体步骤如下：
1.aidh基因的克隆与表达：-从已知菌株基因组dna中pcr扩增aidh基因序列。

-将aidh基因克隆至原核表达载体pet-28a( )中。

-将重组质粒转化至大肠杆菌bl21(de3)感受态细胞中。

5. 研究的创新点

本研究的创新点主要体现在以下几个方面：
1.首次实现了aidh酶在大肠杆菌中的功能性表达和纯化，为后续深入研究aidh酶的酶学性质、作用机制以及应用潜力奠定了基础。

2.建立了aidh酶活性测定方法，并对其酶促反应动力学参数进行了测定，为定量评估aidh酶的催化效率提供了依据。

3.系统探究了aidh酶的最适ph、最适温度、金属离子以及抑制剂对其活性的影响，为深入了解aidh酶的催化机制提供了参考。

6. 计划与进度安排

第一阶段 （2024.12~2024.1）确认选题，了解毕业论文的相关步骤。

第二阶段（2024.1~2024.2）查询阅读相关文献，列出提纲

第三阶段（2024.2~2024.3）查询资料，学习相关论文

7. 参考文献（20个中文5个英文）

1. 刘洋, 黄俊, 谭文, 等. 群感效应抑制剂的研究进展[j]. 中国抗生素杂志, 2020, 45(01): 8-14.

2. 孙蕾, 周志华, 施春雷, 等. 群感效应及其在微生物学中的应用[j]. 微生物学通报, 2018, 45(04): 837-845.

3. 李明, 陈红, 张强. 细菌群感信号分子与群体感应淬灭[j]. 生物工程学报, 2017, 33(01): 1-12.