杨树miRNA156启动子的克隆及报告基因表达载体构建开题报告

1. 研究目的与意义

目的：本研究拟克隆杨树mirna156的启动子并进行报告基因表达载体构建，为进一步将该启动子转入植物，并研究其表达模式、调控机制奠定基础，为将来杨树抗病育种和遗传改良提供理论基础。

意义：启动子在生物生长发育过程中特定基因的定时、定位、定量地表达起到尤为关键的作用。

研究启动子功能对于了解生物生长发育、探讨生物适应环境的机制及实现外源基因在转基因生物中的高效表达等均有重要意义。

2. 国内外研究现状分析

mirna来自于基因组中特定序列，除一些种系特异的mirna家族外，开花植物中至少有20个保守的mirna家族，每个家族在单基因组中有1-31个基因座。

尽管植物mirna的发现和识别时间短，但对mirnas的研究已经成为国内外学者们解析基因表达调控过程的重要内容。

（详见参考文献）

3. 研究的基本内容与计划

1）检索杨树miRNA数据库，获得miRNA156序列；2）检索杨树全基因组数据库，进行miRNA156定位；3）用启动子预测软件预测miRNA156启动子序列；4）采用引物设计软件设计引物；5）选择生理状态良好的植株为研究材料，提取基因组DNA；6）利用PCR技术，设计引物，克隆miRNA156克隆杨树miRNA156的启动子序列；7）利用Gate-Way技术构建报告基因表达载体。

4. 研究创新点

1）实验过程涉及启动子预测软件，引物设计软件（如oligo6）使用，将生物信息学与基因工程两门学科有机的结合。

2）本实验可以为该启动子的表达模式、调控机制的研究打下基础，甚至可以为杨树抗病育种和遗传改良提供理论基础。