粘附-抗污蛋白材料的生物制备及表征开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

一、研究背景生物材料和普通材料的根本区别在于生物材料具有生物相容性。

生物相容性既包括组织相容性，即不会使组织产生炎症甚至能够免疫原性[1]；也包括血液相容性，即不会产生凝血和血栓现象。

普通材料会引起这些问题的一个关键原因是普通材料的表面与蛋白质之间的非特异性吸附作用，而这会导致不溶性纤维蛋白形成[2]、引起血小板黏附与凝聚以及红细胞黏附等机体反应事件，最终可能会引起血栓等严重的医疗后果[3]。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

问题：1、菌种的构筑2、菌种在不同比例的iptg中的蛋白质产量3、菌种在不同发酵温度中的蛋白质产量4、不同od值的菌种的蛋白质产量内容及方法：1、首先将通过基因技术将能够表达所需蛋白的基因链导入大肠杆菌中，来获得可以生产所需蛋白的菌种，之后通过进一步的筛选来提纯大肠杆菌，删选掉错误的大肠杆菌，去除效率低下的大肠杆菌，使最终得到的大肠杆菌可以稳定且高效地表达出实验所需的目标蛋白；2、本次实验使用液体培养基，将获得的大肠杆菌以1：100的比例植入液体培养基中，并在37℃，200r/min的摇床中培养6个小时，培养完成后，在液体培养基中以1：10的比例加入iptg来诱导大肠杆菌表达目标蛋白，并将液体培养基放在37℃，200r/min的摇床中表达24个小时；3、在大肠杆菌表达了24个小时后，取出液体培养基，将瓶中的悬浊液倒入离心管，并将离心管对称放入离心机中进行高速离心，离心机以9000r/min的速度将悬浊液离心15min，离心完成后倒掉上清液，取底层沉淀物；4、将底层沉淀物放入烧杯，并倒入适量平衡液，搅拌均匀，使沉淀物重新悬浮，将烧杯置于冰中进行破碎，破碎机以破碎5秒，停止3秒的循环进行运作，45min后，大肠杆菌已充分破碎，得到新的悬浊液；5、将破碎完成的悬浊液倒入离心管中，并将离心管对称放入离心机中进行高速离心，离心机以9000r/min的速度将悬浊液离心15min，离心完成后取上清液，倒掉沉淀物，上清液中含有本次实验所需的目标蛋白；6、为提纯目标蛋白，将所得的上清液通过镍柱进行提纯，速度为2ml/min。

先用平衡液将仪器中的杂质清洗一遍，再将上一步得到的上清液输入仪器，速度为2ml/min,在输入上清液的过程中要记录仪器pu值的变化；7、输入完成后，取洗杂液进行输入，速度为2ml/min,输入30min;8、30min后，取洗脱液将目标蛋白从镍柱上脱去，输入洗脱液的速度为2ml/min,刚开始从仪器出口流出的液体含有大量杂质，不宜收集。

在观察到pu值呈现上升趋势时，拿烧杯在仪器出口进行收集，pu值的变化曲线呈倒u型，在pu值降到3时，停止收集，得到目标蛋白溶液；9、将目标蛋白溶液放入透析袋中，之后将透析袋放入装满ro水的容器中进行透析，每12h更换容器中的ro水，总共透析24h，最后得到透析完的目标蛋白溶液; 10、将透析完的溶液倒入培养基中，密封好，放入冷冻室里进行冷冻，冷冻12h后，将培养基拿去冻干，冻干完成后培养基上的白色絮状物即是目标蛋白，至此，粘附-抗污蛋白材料的生物制备全部完成。