老鸦瓣种子质量检验规程研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

老鸦瓣tulipa edulis ( miq. ) baker为百合科郁金香属植物。中药材光慈姑为其去膜质皮及绒毛后的干燥鳞茎，具有解毒散结，行血化瘀之功效，主治咽喉肿痛，瘰疬，痈疽，疮肿，产后瘀滞。近年来发现光慈姑在乳腺疾病等方面治疗效果显著，因此对光慈姑的需求量不断增加，而目前光慈姑主要来源于野生，导致其供需矛盾日益突出，实现老鸦瓣规范化栽培成为亟待解决的问题^[1]。通过本课题的研究，为老鸦瓣种子质量检验规程研究奠定基础。

目前关于老鸦瓣方面研究内容较少，国内外还没有关于老鸦瓣种子质量检验规程的研究。但是近几年有不少关于药用植物种子质量检验规程研究的进展，例如甘草^[2]、三七^[3]、玄参^[4]等几十种中药材种子经研究后具有质量标准。

药用植物种子、种苗的生产贯穿于中药材生产的全过程，是中药材产量和品质形成的重要前提和基础^[5]。研究种子为实现老鸦瓣人工繁殖提供了基础，对提高老鸦瓣繁殖系数、保护野生资源，促进资源的可持续利用具有重要意义。此研究可以为老鸦瓣种子质量检验规程研究奠定基础，更好的规范老鸦瓣的生产。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标

（1）研究检验老鸦瓣种子千粒重的最佳方法。

（2）研究检验老鸦瓣种子含水量的最佳方法。

3. 研究的方法与方案

研究方法与实验方案

此研究按照GB /T 3543（农作物种子检验规程）进行。采用常规的种子检验技术。

（1）真实性鉴定。随机从送检样品中数取400粒种子，鉴定时须设重复，每个重复不超过100粒种子。根据种子形态特征，如种子大小、形状、颜色、光泽、表面构造及气味等，必要时刻借助放大镜进行粒观察，并与标准种子样品或鉴定图片和有关资料对照。

（2）重量测定。采用百粒法，五百粒法、千粒法测定老鸦瓣种子重量。分别随机从净种子中数取100粒、500粒、1000粒，三次重复，分别称重，精确至0.1g，计算标准差及变异系数。

（3）水分测定。参照GB/T 3543.2-1995农作物种子检验规程 水分测定执行。取老鸦瓣种子5.0g，分别采用低温烘干法和高温烘干法测定种子含水率，方法如下：

低温烘干法：先将样品盒预先烘干、冷却、称重，并记下盒号，将试样放入预先烘干和称重过的样品盒内，再称重(精确至0.001g)。使烘箱通电预热至110～115℃，将样品摊平放入烘箱内的上层，样品盒距温度计的水银球约2.5cm处，迅速关闭烘箱门，使箱温在5-10min内回升至1052℃时开始计算时间，设置2、4、6、8h ，用坩埚钳或戴上手套盖好盒盖(在箱内加盖)，取出后入干燥器内冷却至室温，约30～45min后再称重。直至后次称重和前次称重不超过0.0005g为止，记下最后一次重量作为烘干后重量。进行水分含量计算。4次重复。

高温烘干法：在1332℃方法进行烘干测定， 首先将烘箱预热至140-145℃，打开箱门5-10min后，烘箱温度须保持130-133℃，样品烘干时间为1h、2h、3h、4h。4次重复。

根据烘后失去的重量计算种子水分百分率，按以下公式计算到小数点后一位：

种子水分(%)=[（M2-M3）/（M2-M1）] 100

式中：M1样品盒和盖的重量，g；

M2样品盒和盖及样品的烘前重量，g；

M3样品盒和盖及样品的烘后重量，g。

（4）发芽试验

①打破休眠。通过先25℃恒温层积50d再转到5℃低温层积30d。

②萌发条件。发芽床采用双层滤纸发芽床；发芽温度选择将种子置于10℃、15℃恒温；光照条件选择将种子分别置于黑暗24h、黑暗8h光照条件下培养（光照强度为3500lx）；发芽计数时间的确定为在适宜种子发芽的条件下，确定初次和末次计数时间，以种子根茎处胚芽伸出时为初次计数时间，以连续3d每天发芽率不超过供试种子总数的1%为发芽结束日期。

③萌发标准的确定：以胚根突破种皮 2 mm 为萌发标准。

萌发率（%）=L₂/L₁100%

L₂达到高峰时种子的萌发粒数；

L₁供试种子粒数。

（5）生活力测定

TTC染色法

①横切去种子的1/2，以不伤害胚，不暴露胚为宜。

②采用TTC浓度和染色时间的梯度试验设计。TTC染色浓度为0.1%、0.3%、0.5%，染色时间为2、4、6、8h，染色结束后，用清水冲洗，逐一剖开检查，观察胚及胚乳的着色情况，以胚和胚乳全部着色为活种子，着色越好，生命力越强。每个处理2次重复，每个重复30粒，对照以沸水煮15min。

用磷酸缓冲液配置不同浓度的TTC溶液，磷酸缓冲液的配制方法如下：

溶液I：称取9.078g磷酸二氢钾(KH₂PO₄)溶解于1000mL蒸馏水中。

溶液II：称取9.472g磷酸氢二钠(Na₂HPO₄)或11.876g磷酸氢二钠(Na₂HPO₄2H₂O)溶解于1000mL的蒸馏水中。

取溶液Ⅰ2份和溶液Ⅱ3份混合即成缓冲液。

种子生活力（％）＝染色种子粒数/供试验种子粒数100%

表1 TTC生活力测定的试验表

可行性分析

（1）本课题研究目的明确，实验设计合理且条理清晰，具有很强的针对性。

（2）本课题所涉及的实验方法成熟，属于经典植物生理学实验，具有很强的可操作性，且实验所涉及的仪器操作较为简便，经指导老师提供，已基本具备。

（3）本课题所在的老鸦瓣课题组对老鸦瓣已有多年的研究，在老鸦瓣的生长发育、光和特性、传粉生物学、种子生理及其萌发特性等方面的研究已取得一些进展与成果。

因此本试验可行性较高。

4. 研究创新点

本课题选用的实验材料为野生老鸦瓣种子，目前，老鸦瓣的种子繁殖技术还未完全成熟，没有广泛应用于人工栽培。此研究可以为老鸦瓣种子质量检验规程研究以及老鸦瓣人工繁殖的研究奠定基础。

5. 研究计划与进展

2013年4月~2013年8月

做好项目前期准备，收集实验材料，熟悉项目所涉及的实验方法。

2013年8月~2013年9月