人胎盘充间质干细胞的提取及分离文献综述

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

人胎盘间充质干细胞的提取及分离

一、研究背景

间充质干细胞具有多向分化的潜能，能够为细胞治疗提供理想的种子细胞，同时也能作为基因治疗的载体细胞，目前已从骨髓、脂肪、脾脏、脐血、脐带、胎肝及胎肾等组织器官中分离出间充质干细胞，但均存在一定的局限性，如取材困难、受年龄限制、组织中间充质干细胞含量少等。最近报道的胎盘来源间充质干细胞以取材容易、数量多等优势成为研究热点。现阶段用于分离间充质干细胞的方法主要有以下几种：密度梯度离心法、贴壁筛选法、流式细胞仪分选法或磁珠分选法[1]。因为间充质干细胞没有特异的表面标志，应用流式细胞仪分选法或磁珠分选法会损失大量细胞，且成本高，因此实验并未采用该法。贴壁筛选法是利用间充质干细胞贴壁生长的特性，通过贴壁培养及传代，使细胞逐渐得到纯化，该方法简单易行。密度梯度法则是利用细胞密度的差别，分离出密度在一定范围内的细胞。

二、研究目的和意义

胎盘的细胞成分较复杂，其中所包含的滋养细胞在母胎免疫耐受过程中起重要作用，胎盘间充质干细胞具有多向分化潜能以及抑制淋巴细胞增殖的特性，常规分离方法通常难以获得大量且纯度较高的上述两种细胞[2]。本研究的目的在于拟建立一次操作即可同时获得大量、较高纯度的滋养细胞和胎盘间充质干细胞的操作方案。意义为所建立的方法可以快速大量消化胎盘组织，同时获得纯度较高并具有活力的滋养细胞和间充质干细胞。

三、研究手段

基于文献和前期研究的基础，人胎盘组织洗净剪碎，采用胰蛋白酶和DNAseⅠ共同消化，分3个阶段，每个阶段在恒温37℃下180r/min消化2min。重悬消化产物，200目筛网过滤后采用Percoll密度梯度分离液分离，收集滋养细胞层和胎盘间充质干细胞层[3]。滋养细胞层以差速贴壁法去除成纤维细胞，胎盘间充质干细胞直接接种于75cm2培养瓶中培养。观察胎盘组织消化情况，计数滋养细胞数量及其细胞角蛋白7的表达，观察胎盘间充质干细胞生长增殖、表型及成骨分化潜能。

四、工作进度安排

（1）取材