柳杉SSR引物的筛选及反应体系的优化开题报告

1. 研究目的与意义

了解DNA分子标记种类以及在林木遗传育种中的应用，建立适宜的柳杉SSR-PCR最佳反应体系,从而为利用SSR标记进行柳杉种质资源分类、遗传图谱构建和遗传变异分析提供依据。

2. 国内外研究现状分析

SSR因其特有的优点而广泛应用于遗传多样性和连锁图谱构建，国内如Tian-Hong Li等利用筛选出的具有多态性的22对SSR标记引物对51个碧桃栽培品种进行遗传多样性分析，共找到111个等位基因，平均每个位点有5个基因，并把这51个栽培品种分成6个群体。徐小林利用SSR分子标记对栓皮栎天然群体遗传多样性进行研究，揭示了栓皮栎自然分布区中心地带的群体具有较高的遗传多样性，而人为对森林的破坏将降低林木群体的遗传多样性，栓皮栎群体的变异主要来源于群体内，群体间分化较小，遗传分化系数仅为0.10455，此外，栓皮栎群体间的遗传距离与地理距离之间存在显著的正相关，这些遗传信息为栓皮栎遗传多样性的保护和利用提供了一定依据。又如孙亚光等利用物来自于其实验室从北美鹅掌楸EST序列中开发出的EST-SSR引物，选取12对通用性好且多态性高的特异性SSR引物，通过SSR分子标记研究了鹅掌楸实验群体内个体的雄性繁殖适合度，揭示了交配距离、性选择倾向在鹅掌楸个体的雄性繁殖适合度中扮演重要角色。又如高洁等利用SSR分子标记对羽叶金合欢(Acaciapennata)的野生种和栽培种进行了分析, 利用改良的CTAB方法优化了其总DNA的提取方法, 并优化了PCR扩增条件。从已有的金合欢属植物的82对SSR引物中筛选出多态性高，稳定性好的12对引物作为羽叶金合欢的SSR分析引物，为进一步对其进行遗传多样性研究提供了依据。国外如Y. Moriguchi（2003）等从日本柳杉cDNA文库、基因组文库和微卫星文库开发出34对SSR引物，用于日本柳杉的遗传多样性分析、亲本鉴定和辅助育种。

3. 研究的基本内容与计划

1.方案拟定

建立正交试验设计，对柳杉ssr-pcr反应的有关因素(如taq酶、dntp引物、mg2 和模板dna)进行对比试验。

2.实验数据采集与处理

4. 研究创新点

特色与创新：由于柳杉分布的局限性（仅在日本和中国小部分地区），大范围关于柳杉的研究尚不完善，但其作为优良用材和观赏树种的事实不可忽视。日本在柳杉方面的研究处于世界前列，对柳杉进行过系统的研究，但我国的柳杉研究还处在初级阶段，目前也尚无系统的对柳杉不同种源进行多样性研究的报道，特别是用分子技术手段。因此，筛选柳杉SSR分子标记引物进而可以对柳杉进行遗传多样性分析是本课题的创新点之一，也为后续研究打下基础。