硫酸氨基葡萄糖氯化钾有关物质分析方法研究文献综述

硫酸氨基葡萄糖氯化钾有关物质分析方法研究

氨基葡萄糖是一种天然的氨基单糖，是合成氨基聚糖的基本物质，同时也是人体及动物内关节组织中糖蛋白的天然成分。氨基葡萄糖具有抗菌、抗癌、治疗关节炎和刺激蛋白多糖合成等功能，还可以诱导K562细胞向巨噬细胞方向分化。研究表明，氨基葡萄糖可改善骨关节炎症状，促进关节软骨的代谢活动，增强胶原糖、氨基聚糖以及其他结构蛋白的合成与代谢，对关节软骨的保护和修复具有十分重要的意义。氨基葡萄糖作为一种预防与治疗骨关节炎药物在大多数国家流行使用，多数国家将其作为非处方营养补充品。日本政府批准的预防和治疗骨关节炎的理想药物；美国将其列为第四大善事补充剂；欧洲则将其作为治疗骨关节炎一线OTC药物、预防骨关节炎的功能保健食品。

氨基葡萄糖是一种从天然甲壳素中提取的氨基己糖，化学名为2-氨基-2脱氧-D-葡萄糖，可由甲壳素经盐酸水解得到D-氨基葡萄糖盐酸盐，并可进一步转化为D-氨基葡萄糖硫酸盐。氨基葡萄糖的化学式为C6H13O5N,分子量为179.17g/mol，其结构中含有-NH2，-OH等活性基团，可以酰化、硫酸化、磷脂化、磺酰化、烷基化、羧甲基化等，易氧化、极不稳定。因带有活性氨基基团而呈碱性，可与硫酸、盐酸复合成盐。氨基葡萄糖分alpha;型和beta;型，易吸潮。

但是，氨基葡萄糖含氨基，属带电糖类，制备、存储过程中很容易发生美拉德反应引起非酶褐变。氨基葡萄糖非酶褐变的机理尚无定论，目前比较认可的褐变机理主要有分子内羰氨反应、反醇醛缩合反应、分子间脱水缩合和烯醇化反应。这些机理的提出主要是基于氨基葡萄糖上的活性氨基和半缩醛羟基，正是有着两种基团的存在才使得氨基葡萄糖容易发生非酶褐变，导致产品颜色加深。氨基葡萄糖降解会产生多种褐变产物，如5-羟甲基糠醛、脱氧果糖嗪、果糖嗪等，对氨基葡萄糖纯度、生物活性剂安全评价造成严重影响，大大影响了其在功能性食品和医药领域的应用。

目前，常用的氨基葡萄糖类药品有硫酸氨基葡萄糖、盐酸氨基葡萄糖、N-乙酰氨基葡萄糖及其与其他组分的复合物。而硫酸氨基葡萄糖是目前世界上公认的一种预防骨关节炎发生、改善骨关节炎症状最为有效的膳食营养补充剂。近年来国外已成功将其引入到全身关节炎的治疗和预防。硫酸氨基葡萄糖在美国被列为食品补充剂而广泛使用，在欧洲则作为治疗关节炎的处方药。欧洲抗风湿联盟（The European League Against Rheumatism,EULAR）指南中将硫酸氨基葡萄糖列为最高级别的推荐药物。但是硫酸氨基葡萄糖单体性质不稳定，降解会产生多种褐变产物，不易储存，为增加其稳定性，将其制成复盐。目前市售硫酸氨基葡萄糖也主要为复盐形式。本文着重介绍硫酸氨基葡萄糖氯化钾有关物质分析方法的研究。

硫酸氨基葡萄糖氯化钾的制备是以甲壳素为原料，经盐酸水解得盐酸氨基葡萄糖，将其与硫酸钾置于水溶液中，通过充分的离子交换反应，并加入作为沉淀剂的有机溶剂，制备硫酸氨基葡萄糖氯化钾。这一系列的制备过程会产生一些杂质，如氯离子、5-羟甲基糠醛、果糖嗪、脱氧果糖嗪等，影响硫酸氨基葡萄糖氯化钾的纯度，生物活性剂安全评价造成严重影响，大大影响了其在功能性食品和医药领域的应用。现行国家标准未制定有关物质检查项，也未见其杂质检测和纯度控制的相关报道，USP28版收载质量标准中采用HPLC法测定含量，由于硫酸氨基葡萄糖氯化钾在紫外区缺乏特征吸收，故采用C18为固定相，以末端紫外吸收波长195nm作为检测波长，HPLC外标法测定含量。试验发现硫酸氨基葡萄糖氯化钾在USP色谱条件下、常用的C18柱并无合适保留；换氨基柱试验发现，虽发现有一合适保留的色谱峰，单经试验证实，该峰有氯离子引起。可见，以200nm以下的极限末端吸收波长为检测手段，易放大溶剂、盐基（无机离子）和共存物质的干扰性相应，试验偏差较大。

针对以上问题，本实验主要研究硫酸氨基葡萄糖氯化钾的含量测定色谱条件优化和有关物质的含量测定及残留溶剂乙醇的检查。硫酸氨基葡萄糖氯化钾的含量测定中，应用高效液相色谱法，建立氨基葡萄糖氯化钾中氨基葡萄糖含量的快速测定方法。采用Hedera NH2 色谱柱（250mmtimes;4.6mm,5mu;m），流动相为乙腈-磷酸缓冲液（65:35），流速为1.0 mL/min，可变波长紫外检测器。需进行方法学验证，对标准曲线、进样精密度、检测限、定量限、回收率、溶液稳定性、系统适用性、重复性、中间精密度、耐用性等项目进行考察。有关物质方面，需配制浓溶液，进行酸、碱、干热、湿热、光照、氧化等方式破坏后稀释至有关物质浓度，研究方法的专属性，并且需要研究溶液的稳定性、杂质影响因子、进样精密度、重复性、中间精密度和耐用性。5-羟甲基糠醛也需要进行含量测定和方法学验证。有机溶剂乙醇的测定需要进行标准曲线、进样精密度、检测限、定量限、回收率等项目的研究。

参考文献：