中心体蛋白FOR20的LisH结构域构建开题报告

研究背景：

微管是由αβ-微管蛋白异二聚体组装的高动态细丝，并且在许多细胞过程中起重要作用，包括细胞分裂和迁移。微管动力学受微管相关蛋白（MAPs）的严格调节，其通过与微管或游离微管蛋白二聚体结合而起作用。FOR20（20kDa的FOP相关蛋白），一种对于纤毛发生和细胞周期进程至关重要的保守蛋白，是一种先前未表征的MAP，其促进微管解聚并促进细胞迁移。FOR20不仅直接结合微管，还通过降低微管生长速率和增加解聚速率和突变频率来调节体外微管动力学。在体外微管动力学测定中，FOR20似乎优先与微管上的游离微管蛋白二聚体相互作用。在HeLa细胞中处理诺考达唑后，FOR20的消耗抑制微管解聚并促进微管再生。此外，FOR20显著抑制哺乳动物细胞的个体和集体迁移。总之，数据表明FOR20起MAP作用以促进微管解聚和细胞迁移。

中心体是大多数动物细胞中主要的微管组织中心。最近据报道，保守的中心体蛋白FOR20（20kDa的FOP相关蛋白）在纤毛发生中发挥重要作用。在多细胞单细胞生物草履虫中，PtFOR20p在基础体生物发生的早期过程中被募集以构建过渡区，并且是基底体在细胞表面对接所必需的。在哺乳动物细胞中，FOR20的消耗显著降低了纤毛细胞的百分比和纤毛的长度。此外，我们的研究小组发现，通过将polo样激酶1募集到中心体，FOR20对于S期进展至关重要。然而，关于中心体蛋白FOR20在微管动力学中的作用知之甚少。

FOR20能够直接促进微管解聚和细胞迁移。FOR20与微管相互作用并通过降低微管生长速率，增加体外解聚速率和突变频率来调节微管动力学。在哺乳动物细胞中，FOR20的显著抑制微管解聚和细胞迁移。这些结果表明FOR20起到先前未识别MAP的作用，促进细胞迁移所需的微管去稳定化。

研究目的：

以人类中心体蛋白FOR20为研究对象，对该基因进行体外重组构建。

研究意义：

这一研究有助于我们深入了解人类中心体蛋白FOR20的生物学功能，有助于了解蛋白质结构和功能的关系，有助于探讨蛋白质的结构或结构域。

研究方法：

以人类中心体蛋白FOR20为研究对象，了解该蛋白的序列特点，对该序列进行分析确定出该蛋白的结构域，确定研究的结构与特点；针对该结构域进行引物设计；用PCR的方法对该序列进行PCR扩增，然后酶切转化；最后将转化的受体菌进行培养，抽提质粒验证构建成功与否。

实验步骤：

（1）通过文献分析了解我们所研究的蛋白质序列特点，对该序列进行分析确定出该蛋

白的结构域，确定研究的结构域特点；

（2）针对该结构域进行引物设计；

（3）用PCR的方法对该序列进行扩增，然后酶切转化；

（4）将转化的受体菌进行培养，抽提质粒验证构建成功与否。

（1）2022-2022-1学期17-20周~2022-2022-2学期第1周~第2周（2022-12-24~2022-3-8），查阅资料，目的基因序列的确定，准备开题报告，外文论文翻译；

（2）第3周~第6周（2022-3-11~4-5），选择突变位点，设计引物，合成基因序列等初步设计；

（3）第7周~第11周（2022-4-8~5-11），目标基因扩增、剪切、细胞转化、细胞培养、转化子的检测以及重组子等

（4）第12周~第14周（2022-5-13~6-2），整理、撰写论文，完成；一张基因扩增电泳检测图、一张质粒酶切电泳检测图，一张重组子构建检测图以及一张蛋白表达电泳图

（5）第15周~第16周（2022-6-3~6-12），提交重组子构建的重组细胞、实验报告、英文翻译、图表等，毕业答辩。