FOR20蛋白的第73位氨基酸（Leu）的突变体构建开题报告

1. 研究目的与意义

研究背景：

在细胞分裂和迁移的过程中，微管有着极其重要的作用。微管是一种由αβ-微管蛋白异二聚体组装而成的高动态细丝。微管动力受一些蛋白的精密调节，中心体蛋白for20就是其中至关重要的一种。

中心体蛋白for20是一种保守蛋白，含有174个氨基酸，在生命活动过程中有重要作用。其可以与微管直接结合，并且还能够增加或降低微管生长速率，增加或降低微管解聚速率和突变速率来对微管的动力进行体外调节。for20蛋白被发现的时间并不长，通过查阅相关文献，发现微管上的游离蛋白二聚体能与for20蛋白相互作用，并且优先级较高。在hela细胞上，用诺考达蹉处理微管后，for20似乎能抑制微管解聚，从而促进微管再生。还有一些研究也表明for20能显著抑制哺乳动物细胞的个体或集体迁移。

2. 研究内容和预期目标

本实验属于分子生物学中的基因突变内容，以人类中心体蛋白for20的第73位氨基酸（leu）为研究对象，对该基因进行体外突变构建。

本实验的内容由以下几个方面构成：

（1）查阅文献，分析for20蛋白的基因序列以及其特点

3. 研究的方法与步骤

研究方法：

通过pcr技术对for20蛋白进行定点基因突变，由于pcr具有特异性强，操作简便，灵敏度高的特点，运用于此基础实验，可以在短时间内获得较为成功的结果。

实验步骤：

4. 参考文献

[1] fengs, song y, shen m, xie s, li w, lu y, yang y, ou g, zhou j, wang f, liuw, yanx, liang x, zhou t. microtubule-binding proteinfor20promotes microtubule depolymerization and cellmigration. cell discov. 2017 sep 5;3:17032.

[2] harmer j, qi x,toniolo g, patel a, shaw h, benson fe, ginger ml, mckean pg. variation in basalbody localisation and targeting of trypanosome rp2 andfor20proteins. protist. 2017aug;168(4):452-466.

[3] sakane k,nishiguchi m, denda m, yamagchi f, magari m, kanayama n, morishita r, tokumitsuh. identification and characterization of a centrosomal protein,for20as a novel s100a6 target.biochem biophys res commun. 2017 sep 30;491(4):980-985.

5. 计划与进度安排

（1）2022-2022-1学期17-20周~2022-2022-2学期第1周~第2周（2022-12-24~2022-3-8），查阅资料，目的基因序列的确定，准备开题报告，外文论文翻译；

（2）第3周~第6周（2022-3-11~4-5），选择突变位点，设计引物，合成基因序列等初步设计；

（3）第7周~第11周（2022-4-8~5-11），目标基因扩增、剪切、细胞转化、细胞培养、转化子的检测以及重组子等