苏州碧螺春CsbHLH2基因克隆及生物信息学分析开题报告

1. 研究目的与意义

植物在长期进化的过程中，为了抵御各种的胁迫有其自身的一整套的复杂机制。其中基因转录表达调节机制是尤为重要的一个部分。拟南芥基因组中至少含有1500多个基因表达转录因子，可见转录因子在生物生长发育的重要性。目前，已经分离出大量与应答各种胁迫和抗逆反应相关的转录因子。bhlh即为其中研究较多较为重要的一个。

2. 研究内容和预期目标

研究内容:

1、采用同源克隆法从苏州碧螺春叶片cdna 中克隆转录因子cs bhlh2

3. 研究的方法与步骤

1、苏州碧螺春rna的提取：采集苏州碧螺春新鲜叶片，在液氮中研磨，用rna提取试剂盒提取总rna。

2、cdna的合成：以上述总rna为模板，用反转录试剂盒合成cdna。

3、以上述cdna 为模板，采用巢式pcr 进行扩增，两轮 pcr 程序均为：95℃预变性 3 min，然后 95℃变性 30 s，55℃退火 30 s，72℃延伸 2 min，30 个循环，最后 72℃延伸10 min。将第一轮 pcr 产物稀释 10 倍后取 1μl 做模板进行第二轮 pcr。

4. 参考文献

[1]carretero-paulet l, galstyan a, roig-villanova i, et al．genome-wide classification and evolutionary analysis ofthe bhlh family of transcription factors in arabidopsis, poplar, rice, moss,and algae [j]. plant physiol, 2010, 153:1398-1412.

[2] gabrielatoledo-ortiz, enamul huq, peter h quail. the arabidopsis basic helix-loop-helixtranscription factor family [j]. plant cell, 2003, 15(8): 1749-l770.

[3] sushengsong, tiancong qi, meng fan, et al. the bhlh subgroup iiid factors negativelyregulate jasmonate-mediated plant defense and development [j]. plos genetics,2013, 9(7): 523-528.

5. 计划与进度安排

1、2022年3月11日～2022年3月25日，接受任务、查阅和翻译文献，撰写开题报告；

2、2022年3月28日-2022年4月8日，完成实验前准备工作，配制各实验所需药品。

3、2022年3月22日～2022年4月4日，采集植物材料，提取苏州碧螺春rna和cdna。