梅毒螺旋体抗体检测试剂盒的开发（纳米磁微粒化学发光法）开题报告

1. 研究目的与意义

梅毒是一种比较严重的性传播疾病，2009年，梅毒报告病例数在我国甲乙类传染病报告中居第三位，其病程漫长，危害严重，早期侵犯生殖器和皮肤，晚期侵犯全身各器官，尤其是心血管和中枢神经系统。tp不仅严重损害成人身体的健康，同时还可由母体经胎盘垂直传播给胎儿，侵犯胎儿肝、脾、肾上腺、牙齿、骨骼、眼及脑神经等全身器官系统，引起早产、流产、死胎、畸胎、或胎传梅毒儿(又称先天性梅毒)，严重影响出生人口质量。

虽然迄今青霉素仍是梅毒的首选药物，但不能防止tp再感染。近年来，全球梅毒发病率呈逐年上升的趋势，现全世界每年约有1200万例新感染病例，此外，梅毒与艾滋病的传播途径相同，i期梅毒黏膜或皮肤屏障缺损为人类免疫缺陷病毒(hiv)提供了进入人体的门户，螺旋体脂蛋白促使巨噬细胞释放细胞因子有利于hiv的复制，感染梅毒后会使感染和传播艾滋病的危险性大大增加。因此，who已经将梅毒列为严重危害人类健康的全球性公共卫生问题。由于至今尚未分理出具有保护性免疫力的梅毒中和抗体，也无有效的预防疫苗问世，因此早期诊断、早期治疗、防止血液传播是非常重要的。1993年我国卫生部将梅毒抗体的检测作为对献血及血液制品的必检项目，以有效控制梅毒经血液及血液制品的传播。

1994年国家卫生部规定hbsag、抗hcv、抗hiv和梅毒四项作为献血员筛选的必检项目。我国每年对梅毒检测试剂的需求量大约有三千多万人份，且呈逐年上升的趋势。现梅毒检测多应用rpr方法，献血员一旦梅毒检测阳性即被淘汰。由于方法本身具有的假阳性反应和结果判定的主观性，造成了一定比例的血源浪费，并给献血员来一定的精神压力，甚至造成家庭纠纷，另外梅毒反应素检测对某些晚期梅毒或经治疗后的梅毒病人所出现的假阴性也会引起输血传播。随着国家输血管理条例和献血法的相继颁布实施，临床尤其是血液中心对检测试剂的质量要求会更加严格，因此研制一种敏感、特异性好、经济、简便的诊断试剂，是当前梅毒防治中的重要课题之一。

2. 研究内容和预期目标

梅毒螺旋体(TP)抗体诊断试剂盒(磁微粒化学发光法)是在成熟的磁微粒技术平台和化学发光技术平台上，结合双抗原夹心法的免疫学反应技术优势，开发出的高灵敏度和特异性的诊断试剂盒，用于人血清中的梅毒螺旋体(TP)抗体检测。

3. 研究的方法与步骤

试剂盒将嵌合的梅毒螺旋体(tp)抗原包被于磁微粒上，加入酶标抗原和待测标本，则标本中所含tp抗体结合到磁微粒上，形成抗原-抗体-抗原复合物;洗涤除去未结合的物质，加入发光底物，则该底物会在酶的催化下发生化学反应并释放出大的能量，产生激发态的中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射出光子，利用发光信号测量仪可测量光量子产额，该光量子产额与标本中tp抗体含量成正比。

实验所用主要仪器：bhp9507滨松化学发光仪，spx-450生化培养箱，eppendorf系列移液器，mixer-1多管旋涡混匀器，tymr-3血液混匀器，vortex-5旋涡振荡器，mini-4k微型离心机，stepper411连续移液器，79-1磁力加热搅拌器，梅特勒al104-01电子分析天平，培养皿，烧杯，量筒，镊子，锥形瓶，玻璃棒。

具体方法：

4. 参考文献

[1]杜兰英，庄辉等．梅毒螺旋体tpnl7重组抗原的表达及其在献血员筛的应用[j].中国输血杂志，2001，14(1)：11.

[2]孙艳.梅毒抗体血清学检测方法的比较及应用评价.中医临床研究，2011,3（3）.

[3]syphiliticperiopticneuritismimickingpapilloedema.themedicaljournalofaustralia2009.191(4).

5. 计划与进度安排

1，2013-02-26～2013-03-20查阅文献，制定实验方案，完成开题报告。

2，2013-03-21～2013-04-14熟悉梅毒螺旋体抗体研究的发展，掌握基本实验操作，并开始实验。

3，2013-04-15～2013-04-20总结前期工作，完成中期汇报。