MEK1定点突变体的构建开题报告

1. 研究目的与意义

长期以来，肿瘤严重危害着人民群众的身心健康。近年来，随着分子生物学、分子药理、病理学等的技术的发展，靶向药物的开发成为抗肿瘤药物开发的热点和重点。分子病理学研究显示MEK1在诸如非小细胞肺癌、结肠癌、前列腺癌等中存在着高表达，使之成为靶向抗肿瘤药物开发的热门靶蛋白。值得注意的是，MEK1的功能结合区域虽已明确，但其结合位点尚未明确。因此，本研究根据现有MEK1蛋白的功能区域，构建95号位点A，144-146号位点EHM的突变体。

2. 研究内容和预期目标

主要研究内容：

1.扩增mek1基因，并进行t载体连接，获得pucm-t-mek1质粒；

2.根据密码子表，对95位点、144-146位点进行突变，设计引物；

3. 研究的方法与步骤

研究方法：

1.采用trizol法，从nci-h1650细胞提取rna，采用mmlv进行反转录获得cdna；

2.根据mek1的活性位点，根据密码子的兼并性原理，对95号位点，144-146号位点进行修改，设计引物；

4. 参考文献

1.samataraa,poulikakospi.targetingras-erksignalingincancer:promisesandchallenges.natrevdrugdiscov.2014,13(12):928-42.

2.liuqh,shiml,sunc,etal.roleoftheerk1/2pathwayintumorchemoresistanceandtumortherapy.bioorgmedchemlett.2015,25(2):192-7.

3.mountziosg,planchardd,bessesb,etal.mitogenactivatedproteinkinaseactivationinlungadenocarcinoma:acomparativestudybetweeneversmokersandneversmokers.clincancerres.2008,14(13):4096-102.

5. 计划与进度安排

1、2022年3月1日—2022年3月15日接受任务，查阅和翻译文献，撰写及完成开题报告；

2、2022年3月16日—2022年3月31日扩增mek1基因全长，并进行t载体转化，设计突变片段所需引物；

3、2022年4月1日—2022年5月15日突变片段扩增，拼接；