基于四个线粒体基因片段的鲀科系统进化分析开题报告

1. 研究目的与意义

鲀形目鱼类为辐鳍鱼纲的其中一目。体粗短，皮肤裸露或被有刺、骨板、粒鳞；腹鳍胸位或连同腰带骨一起消失。大多为海洋鱼类，只有少数生活在淡水中，多数生活在在海洋暖水水域，少数在温带或寒温带，其下分成3个亚目：拟三刺鲀亚目、鳞鲀亚目、四齿鲀亚目。鲀形目最古老的代表种类化石见于下始新世，在演化上与鲈形目刺尾鱼科的祖先十分接近。

利用分子生物学技术从核算水平（dna或rna）对海洋鱼类进行物种鉴别以及探讨物种的起源和进化，是现代生物分子系统学和生物分子进化的研究热点之一，rapd、issa、ssa及aflp等分子标记已成为研究生物种群遗传学、系统进化及保护生物学等的有效手段。目的基因的扩增是基因克隆的基础。

在分子生物学上，人们把将外源dna插入具有复制能力的载体dna中，使之得以永久保存和复制这种过程称为克隆。由于真核生物基因组dna十分复杂，实验中常通过由mrna产生的cdna文库来分离到目的基因片段。高等生物虽然可拥有3万-5万种不同的基因，但在一定时间段的单个细胞或组织中，仅有15%左右的基因得以表达，产生出5000-10 000种不同的mrna分子，使得筛选过程相对简单些。

2. 研究内容和预期目标

选取暗纹东方鲀，活体解剖取肝脏或肌肉，用STE缓冲液漂洗后，-70℃保存备用。

限制性内切酶为TAKARA公司产品，Dnase I、RNase A、Protinase K为Sigma公司产品，其他试剂均为分析纯产品。

3. 研究的方法与步骤

实验流程

（1）暗纹东方鲀线粒体基因组的提取；

（2）感受态细胞制备；

4. 参考文献

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5. 计划与进度安排

2022年11月18日---2016年1月20日：选择并确定论文选题，与指导教师见面。查阅相关文献，了解与课题相关的资料背景。

2022年1月21日---2016年2月26日：接受任务书，明确自己实验大致的方向，并查找相关文献。

第2-6周（2016年2月29日---2016年4月1日）：综合相关文献资料，撰写开题报告，设计实验方案并进行预试验。

第7-10周（2016年4月4日---2016年5月4日）：原材料制备，完成实验前准备工作，配制各实验所需药品；学习提取鱼的基因组dna，its1基因，学会使用pcr仪，对pcr反应体系，循环参数进行摸索和调整等措施，学会制胶，学习制备感受态细胞，pcr目的基因进行实验、综合分析结果、撰写论文。