里氏木霉中内切葡聚糖酶基因(EGⅡ)在大肠杆菌中的克隆与表达开题报告

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1. 研究目的与意义

在里氏木霉纤维素酶系中, 各种组分所占的比例主要由微生物内部的调控机制调节, 很难通过改变培养条件来进行人工控制。

而纤维素酶的不同应用过程往往对纤维素酶各组分的比例有着不同的要求, 如在纺织品水洗时需要eg的相对活性较高, 直接由里氏木霉合成的纤维素酶不能很好地满足这些要求。

为了解决这一问题, 一些研究者采用基因工程技术改造里氏木霉菌株, 使纤维素酶系中某一组分的比例提高, 取得了预期的效果。

2. 国内外研究现状分析

到目前为止，已经有7000多个纤维素酶基因序列和相应的氨基酸序列被报道和公布，500多个纤维素酶的3D结构被预测，这些数据均公布在GenBank、EMBL和DDBJ等共享数据库中。同时，几乎所有克隆到的纤维素酶基因都实现了大肠杆菌或者其他宿主的表达。

3. 研究的基本内容与计划

(1)以里氏木霉为内切葡聚糖基因的来源，基因序列比对、引物设计;

(2)pcr条件优化，扩增内切葡糖酶基因，在大肠杆菌bl21中表达;

(3)建立内切葡聚糖酶活力检测方法，对表达的内切葡聚糖酶进行活力检测。

4. 研究创新点

(1)以微晶纤维素为底物，分析内切葡聚糖酶性能。

(2)pcr条件的优化。

(3)重组大肠杆菌培养条件的优化。