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1. 研究目的与意义
构建用于苯丙氨酸生产的基因工程菌，研究酵母苯丙氨酸解氨酶的基因克隆及其原核表达。
2. 国内外研究现状分析
PAL 是一种只存在于植物及微生物细胞内的酶, 主要分布于高等植物如小麦、大豆链霉菌[ 3]中. 利用PAL 这种逆向催化特性转化肉桂酸生产L- Phe, 已在国内外投入商业规模开发, 成为当前生物化工领域研究与开发的热点.L- Phe 是人体必需氨基酸之一, 在医药、食品、保健等方面有着广阔的用途。
当前世界市场每年对阿斯巴甜的需求已逾2*104 t, 相应地国内外市场对L- Phe 的需求也呈稳定增长趋势
3. 研究的基本内容与计划
本实验研究内容主要包括：
（1） 建立实验必须的分析方法和准备工作：购买红冬孢酵母（r. toruloides）菌株，菌株的ypd培养和保存；基因分析和内含子分子、设计上下游引物
（2） 酵母苯丙氨酸解氨酶基因的克隆：菌种培养、基因组提取、pcr获得苯丙氨酸解氨酶基因、基因克隆与测序
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4. 研究创新点
（1）将红冬孢酵母苯丙氨酸解氨酶基因进行异源表达。
（2）研究了苯丙氨酸解氨酶的酶学性质，有益于之后苯丙氨酸解氨酶在生产上的应用。
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