刺糖多孢菌gdh与gtt基因的克隆与表达开题报告

1. 研究目的与意义

研究背景

当前，国内生命科学领域正在以空前的速度发展着，国内对于基因方面的研究也逐渐深入。众所周知，中国是个人口大国更是个农业大国，如今解决粮食生产、储备等问题至关重要。而传统的化学农药对现代农业的增产增收起到了决定性的作用，但是长期以来一直依赖化学农药也带来了很多的生态、环境等方面的问题。随着杀虫效果的减弱，农作植物的收成受到很大影响。因此，新型的微生物源杀虫剂多杀菌素的研究成为当前的一大热门。

2. 研究内容和预期目标

具体研究内容如下：

1. 通过代谢工程策略，在刺糖多孢菌中对多杀菌素合成途径中涉及到鼠李糖合成的ndp-葡萄糖合成酶（gtt）基因构建表达载体，实现过表达。

2. 在上述基础上，构建葡萄糖脱氢酶（gdh）、ndp-葡萄糖合成酶（gtt）共表达载体，构建工程菌。

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   3. 研究的方法与步骤

   培养方法

   （1）平板和斜面培养：将白色刺糖多孢菌接种在平板或斜面上，然后放置在28℃恒温培养箱中，培养8-10 d，使平板或斜面上长满白色孢子，具体时间看孢子生长情况，保藏备用。

   （2）种子培养：取培养成熟的新鲜斜面，在超净工作台上加入5 ml无菌生理盐水，用灭菌竹签洗下孢子，取1 ml单孢子悬液加入种子培养基中，用八层纱布包好锥形瓶的瓶口并置于摇床中，200 rpm，28℃恒温培养72 h。

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   4. 参考文献

   [1]. xu, y., et al., enhanced lincomycin production by co-overexpression of metk1 and metk2 in streptomyces lincolnensis. journal of industrial microbiology biotechnology, 2018. 45(5): p. 345-355.

   [2]. dziggel, c., h. sch?fer and m. wink, tools of pathway reconstruction and production of economically relevant plant secondary metabolites in recombinant microorganisms. biotechnology journal, 2017. 12(1): p. 1600145.

   [3]. tan, g. and t. liu, rational synthetic pathway refactoring of natural products biosynthesis in actinobacteria. metabolic engineering, 2017. 39: p. 228-236.

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   5. 计划与进度安排

   1）2018-12-25～2019-03-23：查阅资料撰写开题报告；

   2）2019-03-24～2019-04-07：斜面培养基制备与菌种的活化；

   3）2019-04-08～2019-04-18：设计并合成相关引物，通过设置不同退火温度、不同体系组成，寻求一套最优体系以及最优反应温度，切胶回收保存gdh和gtt基因。

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